Un paramètre important en HPTLC est le choix de la phase mobile. Dans cet article nous vous présentons les étapes simples de développement d’un éluant basé sur le triangle de Snyder.
Une des méthodes de développement d’un éluant utilisée par CAMAG est une méthode expérimentale basée sur le principe de la sélectivité des solvants selon Snyder. Le concept est simple : un éluant qui entraîne tous les composants de l’échantillon est trop polaire, celui qui empêche leur migration ne l’est pas suffisamment. Il faut se baser également sur les notions de groupes de sélectivité, de force d’élution, et de miscibilité des solvants entre eux.
Le classement des solvants par Snyder
Snyder a classé les solvants selon 3 critères : en fonction de leur force éluante, de leur capacité à accepter des protons et leur capacité à en donner.
Pour choisir le ou les solvants d’élution, il est possible de se référer au triangle de Snyder :
Le remplacement d’un solvant d’un groupe de sélectivité par un autre solvant du même groupe ne changera pas significativement la séparation mais peut jouer sur la solubilité de l’échantillon.
Les étapes expérimentales de développement
On procède en 3 étapes comme suit :
Etape 1 : solvants purs
On choisit 1 ou 2 solvants dans chaque groupe de sélectivité sauf du groupe IV, puis on réalise la migration à l’aide de chacun des solvants sélectionnés purs. Cette approche permet de couvrir tous les domaines de sélectivité, et d’identifier rapidement les solvants qui n’ont pas d’affinité avec les composés à analyser.
Trois cas se présentent :
- Cas 1 – Les composés sont à un Rf (Rapport frontal) acceptable, entre 0,2 et 0,8. Si la séparation est correcte, la mise au point est terminée sinon, on passe directement à l’étape 3.
- Cas 2 – Tous les composés sont à un Rf > 0,8 : la force éluante est trop élevée. Il faut suivre l’étape 2.
- Cas 3 – Tous les composés sont à un Rf < 0,2 : le solvant a une force éluante trop faible. Il faut suivre l’étape 2.
Etape 2 : ajustement de la force éluante
On procède à l’ajustement de la force éluante pour les cas 2 et 3 :
- Pour une force éluante trop élevée : on peut, soit remplacer ce solvant par un solvant du même groupe de sélectivité mais ayant une force éluante plus faible, soit diminuer la force éluante en diluant le solvant avec un solvant faible (hexane, heptane ou cyclohexane).
- Pour une force éluante trop faible : on peut, soit remplacer ce solvant par un solvant du même groupe mais ayant une force éluante plus forte, soit on augmente la force éluante en ajoutant un solvant fort comme l’eau, un acide (acide acétique ou formique), une base (ammoniaque) ou du méthanol.
Etape 3 : combinaison de solvants
On réalise des combinaisons de solvants de différents groupes de sélectivités en fonction de la séparation obtenue aux étapes précédentes.
Pour une quantification la cible de Rf optimal est autour de 0.3.
Cette valeur représente une migration suffisante mais peu élevé pour éviter les effets de diffusion des composés sur la plaque.
Un développement de phase mobile réussi pour une analyse robuste
Le développement d’une phase mobile en HPTLC repose sur une démarche structurée, simple à mettre en œuvre, mais essentielle pour assurer la qualité de séparation. En s’appuyant sur le triangle de Snyder et une stratégie en trois étapes – test de solvants purs, ajustement de la force éluante, puis combinaison raisonnée – l’analyste peut rapidement converger vers un éluant efficace, reproductible et adapté à sa matrice.
Cette méthode, éprouvée chez CAMAG, permet non seulement d’optimiser la résolution et la sélectivité, mais aussi de renforcer la robustesse des analyses.
Bien maîtriser le choix de la phase mobile, c’est faire un pas de plus vers des séparations fiables, une quantification précise et une méthode HPTLC conforme aux attentes qualité et réglementaires.
